牛奶和奶粉中6種大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留量測(cè)定分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-12 00:00

6.2.5.7 分析條件的選擇

(1) 提取

牛奶和奶粉基質(zhì)為高蛋白質(zhì)高脂肪樣品，甲醇、乙腈以及復(fù)合共沉淀劑都能有效的沉淀蛋白。根據(jù)樣品特點(diǎn)，參考文獻(xiàn)，實(shí)驗(yàn)了甲醇-0.3%偏磷酸、甲醇-磷酸鹽緩沖液、甲醇+復(fù)合沉淀劑[Carrez I(0.36M K4Fe(CN)6·3H2O)和Carrez I(1.04M ZnSO4·7H2O)]、乙腈+乙酸乙酯、乙腈、甲醇等。甲醇、甲醇-0.3%偏磷酸體系和甲醇-磷酸鹽緩沖液體系沉淀蛋白不理想，高速離心后溶液仍然混濁。甲醇+復(fù)合沉淀劑、乙腈+乙酸乙酯體系能夠有效沉淀蛋白，但對(duì)大環(huán)內(nèi)酯的回收率均不高。甲醇+復(fù)合沉淀劑體系可能是因?yàn)楹蛷?fù)合沉淀劑形成了共沉淀，不利于提取；乙腈+乙酸乙酯體系乙腈能沉淀蛋白，但乙酸乙酯對(duì)牛奶中這六種大環(huán)內(nèi)酯提取效率不高，同時(shí)乙酸乙酯提取出大量雜質(zhì)，干擾組分的測(cè)定。用純乙腈既能有效沉淀蛋白又能保證回收率，故實(shí)驗(yàn)選取乙腈作提取劑。

(2)凈化

在本方法的實(shí)驗(yàn)過程中，先后使用了BUNDELUT C18固相萃取柱(3cm3和6cm3)、OasisHLB固相萃取柱(3cm3和6cm3)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)C18柱兩種規(guī)格、3cm3 HLB柱回收率較6cm3 HLB柱低，濃縮液過柱比較費(fèi)時(shí)流速不好控制。6cm3 HLB固相萃取柱的凈化效果最好，柱體不容易堵塞，回收率穩(wěn)定，故選擇6cm3 HLB固相萃取柱為凈化柱。在淋洗液的選擇上，考慮到一定量的有機(jī)溶劑能夠淋洗到部分干擾成分，實(shí)驗(yàn)了不同比例甲醇-水做淋洗液，甲醇的比例由小到大，2mL淋洗并吹干。結(jié)果表明，當(dāng)甲醇的比例增大到40%，吡利霉素、螺旋霉素開始淋洗出柱體。所以實(shí)驗(yàn)選取2mL甲醇-水(3+7)做淋洗液。

在洗脫體積的選擇上，通過圖6-6累積洗脫曲線上可以看出5mL的甲醇才能夠?qū)⑦@六種大環(huán)內(nèi)酯完全洗脫下來。

圖6-6 累積洗脫曲線

(3) 監(jiān)測(cè)離子的確定

用蠕動(dòng)泵以10uL/min注入1μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液來建立確定各化合物的最佳質(zhì)譜條件，包括選擇特征離子對(duì)，優(yōu)化電噴霧電壓、鞘氣、輔助氣、碰撞能量等質(zhì)譜分析條件。分析物的混標(biāo)液進(jìn)入ESI電離源，在正、負(fù)離子掃描方式下分別對(duì)分析物進(jìn)行一-級(jí)全掃描質(zhì)譜分析，得到分子離子峰。5種分析物均在正模式下有較高的響應(yīng)，負(fù)模式下信號(hào)值很低。然后對(duì)各分子離子峰進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析(多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM掃描)，得到碎片離子信息。其具體的質(zhì)譜條件為：鞘氣壓力，30unit；輔助氣壓力，5unit；正離子掃描模式；電噴霧電壓，4000V；毛細(xì)管溫度，320℃；源內(nèi)誘導(dǎo)解離電壓，10V；Q1和Q3狹縫寬度為0.7；碰撞氣為高純氬氣，碰撞氣壓力為1.5mTorr

6.2.5.8 線性范圍和測(cè)定低限

用定溶液配成0～100ng/mL(相當(dāng)于牛奶樣品0～200μg/kg)一系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用牛奶、奶粉樣品空白溶液配成一系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在選定的色譜條件和質(zhì)譜條件下進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量15uL，用分析物峰面積對(duì)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測(cè)組分的濃度作圖，其線性范圍、線性方程和線性相關(guān)系數(shù)見表6-40。由不同基質(zhì)的線性方程可知基質(zhì)對(duì)分析物的測(cè)定有一定的影響，所以方法采用基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)來校對(duì)樣品的含量以消除基質(zhì)的干擾。

表6-40 線性方程和范圍、相關(guān)系數(shù)

根據(jù)最終樣液所代表的試樣量，定容體積，進(jìn)樣量和進(jìn)行測(cè)定時(shí)所受的干擾情況，牛奶中竹桃霉素、紅霉素、替米考星、泰樂菌素、螺旋霉素、吡利霉素為1μg/kg，奶粉中竹桃霉素、紅霉素、替米考星、泰樂菌素、螺旋霉素、吡利霉素為8μg/kg。

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