磺胺類藥物殘留測定方法（三）

時間：2023-03-25 07:55:20來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

磺胺類藥物殘留測定方法（三）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

3)質(zhì)譜檢測器(MSD)

隨著液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)的發(fā)展，特別是色譜-質(zhì)譜接口技術(shù)的完善和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(UPLC-MS/MS)的出現(xiàn)，LC-MS已經(jīng)大量應(yīng)用于SAs的殘留分析，成為目前SAs最靈敏的分析檢測手段。在LC-MS分析中，一般采用尺寸較小的柱子，以乙酸或其他有機(jī)酸調(diào)節(jié)流動相的pH以便于汽化。SAs測定通常采用電噴霧(ESl)接口，正離子掃描。

Shao等建立了豬組織(肉、肝、腎)中17種SAs的LC-MS/MS檢測方法。樣品用無水硫酸鈉除水，乙腈提取，正己烷除脂，Sep-Pak硅膠柱凈化后，LC-MS/MS檢測，甲醇-0.1%甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，ESr、MRM模式監(jiān)測。方法回收率在52%～120%之間，LOD在0.01～1.0ug/kg之間。金明等建立了牛肝中7種SAs殘留量的UPLC-MS/MS測定方法。樣品經(jīng)乙庸提取后，過MCX陽離子交換SPE柱凈化，利用UPLC-MS/MS檢測。色譜柱為ACQITY UPLCTMC18柱，進(jìn)樣體積5uL，流動相為0.2%甲酸甲醇溶液-0.2%甲酸溶液，梯度洗脫，ESI、MRM模式監(jiān)測。該方法LOD為0.02ug/g；加標(biāo)回收率為70.6%～112.5%，RSD為2.6%～14.3%。我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T20759-2006規(guī)定了畜禽肉中16種SAs殘留的檢測方法。用乙腈提取，正己烷脫脂后，LC-MS/MS檢測。色譜柱為Lichrospher 100RP-18(5um，250mm×4.6mmi.d.)，流動相為乙腈-0.01mol/L乙酸銨溶液(12+88，v/v)，流速0.8mL/min，柱溫35℃，進(jìn)樣量40uL，分流比1：3，ESI+、MRM模式監(jiān)測，外標(biāo)法定量。方法LOQ為2.5～40.0ug/kg：添加水平2.5～600.0ug/kg范圍，回收率在65.9%～110.1%之間，RSD在2.63%～12.67%之間。

劉正才等建立了快速測定級魚中11種SAs殘留量的UPLC-MS/MS方法。采用乙腈-二氯甲烷混合溶劑提取，SPE柱凈化后，以UPLC-MS/MS測定。色譜柱為Acquity UPLCBEHC18柱，流動相為5mmol/L乙酸銨-0.2%(體積分?jǐn)?shù))甲酸和甲醇，梯度洗脫，流速0.2mL/min，進(jìn)樣量10uL，ESl+、MRM模式分析，外標(biāo)法定量。該方法的線性范圍為0～50ug/kg，相關(guān)系數(shù)均大于0.990；在2.0ug/kg、5.0 ug/kg、10 ug/kg、20 ug/kg添加水平范圍內(nèi)的回收率為63%～95%，RSD為1.0%～10.0%；LOQ均小于6ug/kg。我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T22951-2008規(guī)定了豚魚、鰻魚中18種SAs殘留量的LC-MS/MS測定方法。用乙腈提取，用正已烷脫脂后，供LC-MS/MS測定。色譜柱為Atlantis Cl8(3um，150mm×2.1mm)，流動相為乙腈-0.1%甲酸-甲醇，梯度洗脫，流速0.2mL/min，柱溫35C，進(jìn)樣量20uL，ESI+、MRM模式監(jiān)測，內(nèi)標(biāo)法定量。方法LOQ均為5.0ug/kg；在添加水平5～50.0ug/kg范圍內(nèi)，回收率在65.9%～110.1%之間，RSD在2.63%～12.67%之間。

郭偉等應(yīng)用UPLC-MS/MS分析牛乳中24種SAs殘留。樣品經(jīng)改良的QuEChERS技術(shù)提取和凈化，采用BEH C18色譜柱分離，0.25%乙酸和乙腈作為流動相進(jìn)行梯度洗脫，UPLC-MS/MS在ESI正離子、MRM模式下檢測。24種藥物在5～100ug/kg濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r均大于0.99；在5～50ug/kg添加濃度水平，平均回收率在64.2%～110.9%之間，RSD為3.2%～13.1%；方法LOD為0.21～1.62ug/kg。余永新等利用UPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)，建立了一種能在10min內(nèi)快速分離和測定牛奶中24種SAs殘留的方法。樣品經(jīng)勻漿、超聲、乙腈重復(fù)提取、氮吹濃縮，流動相溶解，飽和正己烷脫脂。采用ACQUITY UPLCTMBEHC18柱分離，以乙腈-0.2%乙酸為流動相，梯度洗脫，目標(biāo)分析物使用UPLC-MS/MS進(jìn)行測定。以保留時間和離子對進(jìn)行定性和定量，在ESI+和MRM監(jiān)測模式下進(jìn)行樣品分析。該方法LOD為0.04～1.35ug/kg，在1～200ug/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率為61%～117%，RSD為2.92%～18.98%。我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T22966-2008規(guī)定了牛奶和奶粉中16種SAs殘留量的LC-MS/MS測定方法。用高氯酸溶液提取，Oasis HLB固相萃取柱凈化，LC-MS/MS測定。色譜柱為C18(5um，150mm×2.1mm)柱，柱溫30℃，進(jìn)樣量10uL，流動相為0.1%乙酸-甲醇，梯度洗脫，流速0.2mL/min，ESl+、MRM模式掃描。外標(biāo)法定量。方法LOQ為1.0～4.0ug/kg；牛奶回收率在72.2%～94.9%之間，RSD在3.12%～8.45%之間：奶粉回收率在79.1%～95.9%之間，RSD在2.35%～7.89%之間。

Thompson建立了蜂蜜中7種SAs的LC-MS/MS分析方法。樣品經(jīng)酸水解后，過濾，直接進(jìn)LC-MS/MS檢測。采用梯度洗脫程序，在線自動凈化，通過六通閥切換將凈化后的分析物注入質(zhì)譜系統(tǒng)。該方法回收率為93.3%～101.9%，LOD為0.5～2ug/kg。我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18932.17-2003規(guī)定了蜂蜜中16種SAs的殘留檢測方法。用pH2磷酸溶液提取，經(jīng)陽離子交換柱和Oasis HLB固相萃取柱凈化后，用LC-MS/MS檢測。色譜柱為Lichrospher*100RP-18(5um，250mm×4.6mmi.d.)，流動相為乙腈-0.01mol/L 乙酸銨溶液(12+88，v/v)，流速0.8mL/min，柱溫35℃，進(jìn)樣量40uL，分流比1：3，ESI+、MRM模式監(jiān)測。在添加水平1.0～300.0ug/kg內(nèi)，其回收率在70%～110%之間，RSD在2.65%～11.52%之間：LOD為為1.0～12.0ug/kg。我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T22947-2008/9引規(guī)定了蜂王漿中18種SAs殘留量的LC-MS/MS測定方法。用去離子水提取，三氯乙酸沉淀蛋白，Oasis MCX離子交換柱凈化后，LC-MS/MS測定。色譜柱為Atlantis C18(3um，150mm×2.1mm)，流動相為乙腈-0.1%甲酸-甲醇，梯度洗脫，流速0.2mL/min，柱溫35℃，進(jìn)樣量20uL，ESI+、MRM模式監(jiān)測，內(nèi)標(biāo)法定量。方法LOQ均為5.0ug/kg；添加水平5.0～50.0ug/kg 范圍，回收率為74.9%～123.0%，RSD為2.12%～8.91%。

劉佳佳等利用LC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)，建立了一種在28min內(nèi)快速分離和測定雞肉、豬肉、牛肉、羊肉、蜂蜜、牛奶中24種SAs殘留的方法。樣品用乙腈和乙酸乙酯提取，經(jīng)正己烷LLP凈化后，進(jìn)LC-MS/MS分析。采用EclipseXDB-C18色譜柱，柱溫30℃，樣品溫度25℃，進(jìn)樣體積5uL，流動相為乙腈和0.2%乙酸溶液，流速0.20mL/min，梯度洗脫，ESI正離子掃描，MRM模式檢測。該方法LOD為0.27～7.45ug/kg，LOQ為0.957～9.89ug/kg；在5～300ug/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，在10ug/kg、20ug/kg、50ug/kg三個添加濃度上的回收率為60.8%～122.9%，RSD為0.01%～19%。

Huang等建立了一種液相色譜-四極桿串聯(lián)線性離子阱質(zhì)譜(LC-QqLIT)方法，分析動物組織中的SAs。樣品處理采用快速單管提取/多組分分配吸附凈化技術(shù)(SEP/MAC)，LC-QqLIT在正離子化模式下進(jìn)行66Da(NLS)中性丟失掃描及m/z108母離子掃描(PreS)，獲得SAs全面的質(zhì)子化分子離子峰，其中包括N-乙酰基和羥胺代謝產(chǎn)物以及其可能的二聚體。另外，母離子掃描引起的結(jié)果自動提高了子離子譜圖的采集，并且能夠在一次分析中同時篩查、描繪和確認(rèn)大量SAs。該方法的準(zhǔn)確度(67%～116%)、精密度(RSD<25%)和靈敏度(LOQ≤7.5ng/g)能滿足SAs的檢測標(biāo)準(zhǔn)。通過將基質(zhì)獨立SEP/MAC方法和具有多參數(shù)匹配算法的低分辨LC-QqLIT結(jié)合，可以作為一個有價值的半定向篩查方法，用于快速篩查和對實際樣品進(jìn)行可靠的定量/確證分析。Heller等還建立了同時檢測雞蛋中15種SAs的LC-MSn分析方法。樣品用乙腈提取，經(jīng)C18 SPE柱凈化后，用LC-MS2測定。該方法的確證濃度可以達(dá)到5～10ng/g，定量范圍在50～200ppb之間。

液相色譜-四極桿-飛行時間質(zhì)譜(LC-qTOF-MS)也開始用于SAs的篩選檢測。Turmipseed 等開發(fā)了LC-qTOF-MS篩查牛奶中多種SAs的方法。樣品用乙腈提取，分子量截留過濾器凈化后，用LC-qTOF-MS檢測：采集TOF的MSl數(shù)據(jù)，通過保留時間和準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)篩查，準(zhǔn)確度可以達(dá)到97%，在關(guān)注水平的線性和回收率都可以接受。另外，[M+H]+離子的二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)被用于確證。Peters 等采用LC-qTOF-MS建立了雞蛋、魚、肉中100種獸藥(包括SAs)的篩查方法。該方法線性良好，回歸系數(shù)平方大于0.99；在4～400ug/kg濃度范圍，平均質(zhì)量誤差為3ppm，平均SigmaFit值為0.04；方法回收率在70%～100%之間，重復(fù)性為8%～15%，重現(xiàn)性為15%～20%：靈敏度滿足限量要求。

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