液相色譜-串聯質譜法測定牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留量

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

9.2.4.1 適用范圍

適用于牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留量的液相色譜-串聯質譜法測定。方法檢出限：牛奶中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和雙烯雌酚為1.0ug/L；奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和雙烯雌酚為8.0μg/kg。

9.2.4.2 方法原理

牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留，用乙腈作為蛋白沉淀劑和提取劑進行提取，陰離子固相萃取柱進行凈化，用液相色譜-串聯質譜儀測定，內標法定量。

9.2.4.3 試劑和材料

甲醇、乙腈：色譜純；氨水、甲酸、氫氧化鈉：分析純。

5mol/L氫氧化鈉溶液：稱取200g氫氧化鈉，用蒸餾水定容到1L。

淋洗液：氨水-水(1+19，v/v)；洗脫液：甲酸-甲醇(1+19，v/v)。

激素及代謝物標準物質：玉米赤霉醇(包括a-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇，各50%)純度≥97%；玉米赤霉酮，純度≥97%；己烯雌酚，純度≥99%；己烷雌酚，純度≥98%；雙烯雌酚，純度≥98%。

標準溶液：分別準確稱取適量的玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、雙烯雌酚和己烷雌酚標準物質，用甲醇配制成1mg/mL標準貯備溶液。再根據需要以甲醇配制成不同濃度的混合標準溶液作為標準工作溶液，保存于4℃冰箱中。

內標標準物質：a-玉米赤霉烯醇-4氘代，純度≥99%；己烯雌酚-8氛代，純度≥98%。

內標標準溶液：準確稱取適量玉米赤霉烯醇-4氘代和己烯雌酚-8氘代標準物質，用甲醇分別配制成1mg/mL標準貯備溶液。再以甲醇稀釋成適用濃度的混合內標工作溶液，保存于4℃冰箱中。

基質標準工作溶液：將標準工作溶液及內標工作溶液混合后在氮吹儀中吹干，以基質提取液溶解，渦旋30s后即為基質標準工作溶液。

Oasis MAX 陰離子固相萃取柱或相當者：60mg，3mL。

9.2.4.4 儀器和設備

液相色譜-串聯質譜聯用儀：配有電噴霧電離源；自動固相萃取儀或固相萃取裝置；氮氣吹干儀；渦旋振蕩器；離心機：轉速大于3500r/min；高速離心機：轉速大于9000r/min，溫度可控制在4℃。

9.2.4.5 樣品前處理

(1) 試樣制備

牛奶：取50mL新鮮或解凍的牛奶混合均勻，3500r/min離心5min，取下層；奶粉：取12.5g奶粉于燒杯中，加適量35～50℃水將其慢慢溶解，轉移至100mL容量瓶中，待冷卻至室溫，用水定容混勻。取50mL，以3500r/min離心5min，取下層。

(2) 樣品量取

于50mL離心管中，分別加入不同量混合標準工作溶液，使各被測組分玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和雙烯雌酚的濃度為2.5ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL。再分別加入適量內標標準工作溶液，使其濃度均為10ng/mL，在氮吹儀上于40℃水浴中吹干。取5個陰性樣品，每個樣品為5mL，置于上述離心管中渦旋混合后，加10mL乙腈，渦旋混合3min，3500r/min離心10min，取上清液于離心管中，再向樣品中加入5mL乙腈，同前操作，合并提取液，50℃下氮吹至體積小于0.1mL。加水10mL，用5mol/L NaOH調節pH至11.0，4℃，9000r/min離心5min，備用。

(3)提取凈化

固相萃取凈化條件：先用2mL甲醇、2mL水將柱子活化，流速均為4mL/min。將樣品上清液上柱，流速為1mL/min，依次用1mL淋洗液、0.5mL甲醇以3mL/min的速度淋洗，通入20mL空氣以4mL/min的速度吹過OasismAX柱。用4mL洗脫液洗脫，流速為1mL/min，加入30mL空氣以6mL/min的速度吹過OasismAX柱，收集洗脫液。將洗脫液在氮吹儀上于40℃水浴中吹干，加入1mL流動相，渦旋30s溶解。溶液過0.2μm濾膜后，供液相色譜-串聯質譜測定。

(4) 基質提取液

空白樣品，除不加入標準工作溶液和內標工作溶液外，其他操作同上述步驟處理后得到的溶液。

(5) 實測樣品溶液的制備

取待測樣品5mL于50mL離心管中，加入適量內標標準工作溶液，使其最終定容濃度均為10ng/mL按上述步驟操作。

(6) 空白基質溶液的制備

取陰性樣品5mL于50mL離心管中，按上述步驟操作。

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