液相色譜-串聯質譜法測定牛奶和奶粉中4種頭孢菌素的殘留量

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

5.2.7.1 適用范圍

牛奶和奶粉中頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢喹肟殘留量的液相色譜-串聯質譜測定。牛奶的方法檢出限：頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢喹肟為4.0μg/kg；奶粉的方法檢出限為：頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢喹肟為32μg/kg。

5.2.7.2 方法原理

牛奶和奶粉中頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢喹肟殘留，用乙腈、磷酸鹽緩沖溶液提取，固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯質譜儀測定，外標法定量。

5.2.7.3 試劑和材料

甲醇、乙腈：色譜純；磷酸二氫鈉(NaH2PO4)、氫氧化鈉、乙酸、正已烷：優級純。

乙腈-水溶液(3+1，v/v)：量取60mL乙腈和20mL水充分混合。乙腈飽和的正己烷：取100mL正已烷和50mL乙腈于250mL分液漏斗中，振搖1min，靜置分層后，棄掉乙腈。5mol/L氫氧化鈉溶液：稱取20g氫氧化鈉，用水溶解，定容至100mL。0.10mol/L磷酸二氫鈉緩沖溶液：稱取12.0g磷酸二氫鈉，用水溶解，定容至1000mL，然后用氫氧化鈉溶液調節至pH8.5。

頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢喹肟標準物質純度≥99%。

1.0mg/mL四種頭孢菌素標準儲備溶液：準確稱取適量的每種標準物質，分別用水配制成濃度為1.0mg/mL的標準儲備溶液。儲備液貯存在-18℃冰柜中。

四種頭孢菌素標準混合工作溶液：根據需要吸取適量的每種頭孢菌素標準儲備溶液，用水制成適當濃度的混合標準工作溶液。

OasisHLB固相萃取柱或相當者：500mg，6mL。使用前依次用5mL甲醇、5mL水和10mL磷酸二氫鈉緩沖溶液預處理，保持柱體濕潤。

5.2.7.4儀器和設備

液相色譜-串聯四極桿質譜儀，配有電噴霧離子源；分析天平：感量0.1mg、0.01g；固相萃取真空裝置；貯液器：50mL；微量注射器：25μL，100μL；均質器；高速冷凍離心機：帶有50mL具塞離心管，轉速達到10000r/min以上；刻度樣品管：5mL，精度為0.1mL；旋轉濃縮儀；氮氣濃縮儀。

5.2.7.5樣品前處理

(1)試樣制備

從全部樣品中取出有代表性樣品約1kg，充分混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器內。密封后作為試樣，標明標記。在抽樣和制樣的操作過程中，應防止樣品受到污染或發生殘留物含量的變化。將試樣于-18℃保存。

(2)試樣溶液的提取

a.牛奶：稱取5g試樣(精確到0.01g)置于50mL離心管中，加入20mL乙腈，使用均質器均質1min，提取液使用高速冷凍離心機在10℃10000r/min離心10min，把上層提取液移至另一離心管中。用15mL乙腈-水溶液重復提取一次，合并兩次的提取液，并加入10mL乙腈飽和的正己烷，振蕩1min，棄掉正己烷。把提取液移至100mL雞心瓶中，在40℃用旋轉濃縮儀旋轉蒸發除去乙腈。

b.奶粉：稱取0.5g試樣(精確到0.01g)置于50mL離心管中，加入4.0mL水，使奶粉充分溶解，加入20mL乙腈，使用均質器均質1min，提取液使用高速冷凍離心機在10℃ 10000r/min離心10min，把上層提取液移至另一離心管中。用15mL乙腈水溶液重復提取一一次，合并兩次的提取液，并加入10mL乙腈飽和的正己烷，振蕩1min，棄掉正己烷。把提取液移至100mL雞心瓶中，在40℃用旋轉濃縮儀旋轉蒸發除去乙腈。

(3)試樣溶液的凈化

向已除去乙腈的樣品溶液中加入20mL磷酸二氫鈉緩沖溶液，然后用氫氧化鈉溶液調節至pH=8.5。把樣品提取液移至下接OasisHLB固相萃取柱的貯液器中，以3mL/min的流速通過固相萃取柱，先用5mL磷酸二氫鈉緩沖溶液洗滌雞心瓶并過柱，再用2mL水洗柱，棄去全部流出液。用2mL乙腈洗脫，收集洗脫液于刻度樣品管中，在40℃氮氣濃縮儀吹干，用2mL水溶解殘渣，搖勻后，過0.2um濾膜，供液相色譜-串聯質譜儀測定。

(4)空白樣品添加標準混合工作溶液的制備

a.牛奶分別準確移取適量四種頭孢菌素標準混合工作溶液，添加到5.0g樣品中，按照上述步驟操作，制得頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢喹肟濃度分別為4.0μg/kg、8.0μg/kg、16ug/kg、40μg/kg四個樣品添加標準混合工作溶液，供液相色譜-串聯質譜儀測定。

b.奶粉分別準確移取適量四種頭孢菌素標準混合工作溶液，添加到0.5g樣品中，按照上述提取凈化步驟操作，制得頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢喹肟濃度分別為32ug/kg、64ug/kg、128μg/kg、320μg/kg四個樣品添加標準混合工作溶液，供液相色譜-串聯質譜儀測定。

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