甾類同化激素類藥物殘留分析技術測定方法（二）

時間：2023-03-25 04:15:42來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

甾類同化激素類藥物殘留分析技術測定方法（二）

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

(3)高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)

HPLC是20世紀70年代發展起來的一種高效、快速的分離分析技術，可同時測定多種激素殘留。與GC相比較，HPLC不受樣品揮發性和熱穩定性的限制，特別適合于高沸點、大分子、強極性和熱穩定性差的化合物的分離分析，缺點是檢測靈敏度稍差，溶劑消耗量大，且很多溶劑對人體健康有一定的損害。主要采用的檢測:器有紫外檢測器(ultraviolet detector，UVD)/二極管陣列檢測器(diode-array detector，DAD)和熒光檢測器(Fluorescence Detector，FLD)。

1)UVD/DAD檢測

郁倩建立了畜禽肉中同時檢測雌三醇、雌二醇、炔雌醇和雌酮等4種ASs的HPLC方法。色譜分離采用Eclipse XDB C18(4.6mm×150mm，5μm)色譜柱，流動相為乙腈和水，梯度洗脫，流速1.0mL/min，DAD在210nm檢測。4種雌激素分離效果良好，標準曲線相關系數r大于0.9993，方法LOD為3.9～4.9ng/g，，回收率為68%～106%，RSD小于6%。Liu等建立了豬肉中醋酸群勃龍、β-群勃龍的HPLC分析方法。樣品用水和乙酸乙酯勻質，振蕩分層后，有機相用無水Na2SO4干燥，再經硅膠柱凈化后，HPLC-UVD檢測。采用Capcellpak C18色譜柱(250mm×4.6mmi.d，5μm)分離，甲醇-水(70+30，v/v)等度洗脫，流速1.0mL/min，檢測波長為340nm。醋酸群勃龍、β-群勃龍的LOD分別為0.12μg/kg和0.22μg/kg，LOQ分別為0.37μg/kg和0.66μg/kg，RSD小于等于13.25%。鄒琴建立了羅非魚中甲基睪酮殘留測定的HPLC方法。樣品經乙醚超聲提取，石油醚凈化，以ODS-C18柱分離，77%甲醇溶液為流動相，流速1.0mL/min，UVD檢測波長為254nm，外標法定量。該方法在40～10000μg/L(μg/kg)范圍內線性關系良好，LOD在3～27μg/L(μg/kg)范圍內，LOQ在8～80μg/L(μg/kg)范圍內；平均加標回收率在75.9%～94.1%之間，CV在1.31%～6.63%之間。

吳啟陸等對雞蛋中雌二醇、雌酮、雌三醇和睪酮等4種ASs的殘留檢測方法進行了研究。用甲醇提取，上清液用0.22um微孔濾膜過濾后，HPLC-UVD檢測。色譜柱為ZORBAX EcLipse XDB-C18柱，流動相為乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.01moL/L醋酸鈉溶液(20+20+10+50，v/v)，等度洗脫，流速1.0mL/min，檢測波長為270nm。方法LOD為0.01μg/mL，平均回收率為75.8%～104.3%。

Koole等報道了牛尿中ASs的HPLC多殘留檢測方法。采用HypersilOODS(150mm×4.6mmi.d，5μm)分析柱，乙腈和水為流動相，梯度洗脫，DAD在190～400nm范圍檢測。雄激素的LOD為0.5～5ng，雌激素為5～10ng。

2)FLD檢測

Dong等建立了檢測魚和蝦中雌二醇、雌三醇、4-羥雌甾二醇和2-甲氧基雌二醇的HPLC-FLD方法。樣品經乙腈提取，MSPD凈化，HPLC-FLD測定。分析柱為vp-ODS-C18柱，流動相為甲醇-水(65+35，v/v)溶液，流速1.0mL/min，激發波長為280nm，發射波長為310nm。除4-羥雌甾二醇為60%外，其他3種雌激素的回收率均大于80%，儀器精密度小于8%，方法精密度小于13%，LOD為0.02～0.44μg/mL，LOQ為0.06～1.34μg/mL，可用于水產樣品中雌激素定量分析研究。

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