阿維菌素類藥物殘留測定方法（三）

時間：2023-03-24 21:00:01來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

阿維菌素類藥物殘留測定方法（三）

[db:作者] / 2022-12-26 00:00

(4)液相色譜-質(zhì)譜法(liquid chromatography mass spectrometry，LC-MS)

由于檢測器選擇性的限制，HPLC方法存在靈敏度相對較低的缺點。隨著電噴霧電離(ESI)及大氣壓化學(xué)電離(APCI)技術(shù)的快速發(fā)展，單四極桿(MS)、離子阱(MSn)、三重四極桿(MS/MS)、飛行時間(TOF)等分析器的相繼出現(xiàn)，不僅使AVMs的檢測靈敏度提高，而且能方便地對AVMs，多殘留組分進(jìn)行同時檢測。同時，根據(jù)MS提供的離子信息，能夠進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。[M-H]-、[M+H]+和[M+Na]+加合離子是LC-MS分析中常選用的監(jiān)測離子。IVM的裂解方式(圖21-2)代表了AVMs的分子裂解機(jī)理。LC-MS已成為目前AVMs殘留分析的首選。

圖21-2 IVM的主要裂解途徑

1)液相色譜-單級質(zhì)譜法(LC-MS)

早期報道的AVMs確證技術(shù)主要采用LC-MS方法，且主要選用APCI源。Heller等采用LC-粒子束電離源(PBI)-MS在負(fù)離子化學(xué)電離(NCI)方式下檢測牛奶和牛肝中的IVM。樣品提取液經(jīng)在線堿性氧化鋁柱凈化后，進(jìn)LC-MS測定，用小孔徑的C18色譜柱分離，梯度洗脫，流動相中加入適量的醋酸銨提高離子化效率。選擇離子監(jiān)測(SIM)模式下，檢測IVM母離子和4個碎片離子進(jìn)行確證。由于存在一定的基質(zhì)效應(yīng)，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。該方法的LOD為4ng。Wu等報道了豬肝中AVM和IVM的檢測方法。樣品提取液用IAC柱凈化后，進(jìn)LC-MS檢測。色譜柱為Zorbax Eclipse XDB-Cs柱，甲醇-水(85+15，v/v)為流動相，流速0.5mL/min，采用APCI源，在負(fù)離子模式下監(jiān)測[M-H]-離子。添加水平在5～100μg/kg時，AVM和IVM的平均回收率分別為74%～94%，65%～87%。其LOD均為5μg/kg。Ali等開發(fā)了牛肝中EPR、M0OX、AVM、DOR和IVM的多殘留檢測方法。樣品的乙腈提取液用C8柱和堿性氧化鋁柱凈化后進(jìn)LC-MS測定。采用APCI源，正離子模式監(jiān)測，通過與標(biāo)準(zhǔn)溶液或陽性添加樣品的保留時間和離子豐度的比較來定性。采用該方法對添加濃度為25ppb的陽性控制樣品進(jìn)行了確證。Turmipseed等采用LC-非放電APCI(ND-APCI)-MS來檢測AVM。采用商業(yè)化的LC-APCI源，但關(guān)掉了電暈放電。與常規(guī)ESI和APCI源相比，該電離方式是利用藥物在溶液中形成的陽離子或Na加合離子，對某些化合物而言，ND-APCI源具有更高的靈敏度和選擇性。作者采用該技術(shù)成功分析了牛奶中的AVM。

2)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)

LC-MS/MS可以采用APCI、ESI和APPI三種電離源。

A.APCI源

Howells等建立了牛肝臟中AVMs的定量和確證方法。為便于陰離子的形成，分析物在堿性pH下進(jìn)行LC分離，APCI電離負(fù)離子模式監(jiān)測，MSn多級質(zhì)譜分析，每個母離子各監(jiān)測2個子離子。

EPR、AVM、DOR、MOX和IVM的CCB分別為3.1ng/g、3.2ng/g、2.2ng/g、4.0ng/g和3.2ng/g，平均回收率分別為70.9%、69.1%、65.9%、69.7%和73.2%，RSD為11.6%、3.9%、6.4%、9.3%和10.5%。Campillo等報道了牛奶中EPR、AVM、DOR、MOX和IVM的分析方法。樣品提取液進(jìn)LC-MSn，采用APCI源電離，負(fù)離子模式，多級質(zhì)譜檢測。方法LOQ為0.1～2.4ng/g，回收率在89.5%～105%之間，RSD小于9%。

B. ESI源

ESI是目前AVMs的LC-MS分析中最常采用的電離方式。

Hino等在ESI正離子模式下檢測牛肝中AVM、IVM、EPR、DOR和MOX殘留。分析物用TSK-GEL ODS 100V色譜柱分離，乙腈和含0.1%甲酸的0.1mmol/L甲酸銨溶液為流動相，梯度洗脫，流速0.2mL/min，多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)檢測，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。方法回收率在87.9%～99.8%之間，日內(nèi)精密度為1.5%～7.4%，日間為1.5%～8.4%。鄭衛(wèi)東等采用LC-MS/MS同時測定豬肝臟中AVM和IVM的殘留量。樣品提取凈化后，進(jìn)儀器分析。ESI電離正離子，MRM模式檢測，以保留時間和子離子比定性，外標(biāo)法定量。方法LOD均為2.0μg/kg，LOQ為5.0μg/kg；添加水平在2～20μg/kg范圍內(nèi)，AVM和IVM的平均回收率分別為77.0%～83.3%和76.9%～79.8%，RSD分別小于12.1%和13.0%。Rubensam等報道了采用LC-MS/MS確證分析牛肉中AVMs的殘留分析方法。樣品經(jīng)溶劑提取，低溫冷凍除脂后，LC-MS/MS確證檢測。方法平均回收率為88.9%～100.7%，重復(fù)性CV為0.78%～5.1%，重現(xiàn)性CV為0.28%～9.0%；方法靈敏度滿足MRLs要求。Hernando等開發(fā)了鮭魚肌肉中AVM、IVM、DOR的LC-MSMS測定方法。樣品用乙腈提取，氧化鋁柱凈化后進(jìn)樣分析。采用粒徑1.8um的小顆粒填料色譜柱分離，再進(jìn)混合四極桿/線性離子阱(QqQ(LIT))系統(tǒng)，ESI電離，通過線性加速(LINAC)高壓碰撞室，允許MS在MRM模式下快速掃描采集。作者對減少駐留時間對譜圖質(zhì)量和靈敏度的影響進(jìn)行了評估，當(dāng)駐留時間由50ms減小到10～20ms，譜峰面積和信噪比都有增加。方法靈敏度優(yōu)于μg/kg級別，樣品處理中不需要濃縮，儀器的定量限(ILQ)為0.15～5ppb；采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，方法回收率為80%～95%。

Dahiya等建立了牛奶中IVM、DOR和MOX的分析方法。LC-MS/MS采用ESI正離子、MRM模式，檢測碎片離子:892.71>569.6、892.71>551.5(IVM)，916.88>593.83、916.88>331.40(DOR)，640.85>199.03、640.85>498.61(M0X)。IVM、DOR和MOX的LOD分別為0.1、0.1和0.2μg/kg，LOQ分別為0.2、0.2和0.5μg/kg。Sheridan等報道了快速檢測牛奶中AVM、IVM、DOR、EPR和MOX的多殘留分析方法。樣品用乙腈提取后，LC-MS/MS進(jìn)行定性、定量分離檢測，質(zhì)譜選用ESI正離子監(jiān)測。該方法LOD為0.016～0.117μg/kg。Durden等采用LC-MS/MS測定了牛奶中的AVM、DOR、EPR、IVM和MOX。AVM、DOR和IVM結(jié)構(gòu)中只含有C、H、O元素，可以用ESI負(fù)離子模式監(jiān)測；其他藥物含有N元素，可以用ESI正離子模式監(jiān)測。作者對正、負(fù)兩種電離方式進(jìn)行了比較。在負(fù)離子模式下，采用三乙胺-乙腈為流動相，以SEL為內(nèi)標(biāo)，AVM、DOR、IVM、EPR和MOX的線性范圍為1～60μg/kg，方法LOD為0.19～0.38μg/kg；當(dāng)以甲酸-甲酸銨-乙腈為流動相，正離子模式下檢測時，具有最佳的靈敏度，線性范圍為0.5～60ug/kg，方法LOD為0.06～0.32μg/kg；但負(fù)離子監(jiān)測的線性更好，更穩(wěn)定。Frenich等報道了采用超高效液相色譜-電噴霧-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-ESI-MS/MS)方法檢測雞蛋中IVM的殘留分析方法。方法回收率在60%～119%之間，RSD小于25%，LOQ低于5μg/kg。

Wang等建立了豬肉、豬肝、魚肉和牛奶中AVM、IVM、DOR和EPR的測定方法。分析物用UPLC分離，在ESI電離、正離子，MRM模式下檢測，整個分析時間在3.5min以內(nèi)。采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，4種AVMs的LOD和LOQ分別為0.05～0.68μg/kg和0.17～2.27μg/kg；方法回收率在62.4%～104.5%之間。

C.APPI源

Turnipseed等報道了采用LC-MSn多級質(zhì)譜技術(shù)檢測牛奶中EPR、IVM、DOR、MOX的殘留分析方法。樣品用乙腈提取，C18柱凈化后，LC-MSn檢測。作者對大氣壓光化電離源(APPI)電離、APPI/APCI復(fù)合電離和ESI電離的響應(yīng)強(qiáng)度進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)與藥物性質(zhì)和流動相構(gòu)成有關(guān)。當(dāng)監(jiān)測負(fù)離子時，使用紫外燈可以增加MS的響應(yīng)；然而，采用APPI/APCI復(fù)合電離源，正離子監(jiān)測，且關(guān)掉電暈放電電流，無論是否打開紫外燈時，能夠獲得最佳響應(yīng)值。采用MSn多級技術(shù)確證。當(dāng)EPR和IVM在添加水平1～20μg/kg，DOR和MOX在5～20μg/kg時，方法回收率大于60%，RSD小于20%。

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